1.回復
●1． 凍結バイアルを液体窒素から取り出し、すぐに 37 度の水浴に入れ、少し振ってください。 液体が溶けたら（約1-1.5分）、取り出してアルコールをスプレーし、超清潔な作業台に置きます.
●2． 上記の細胞懸濁液を 10ml の培地で満たされた 15ml の遠心チューブに吸引し (凍結保存チューブを培地で洗浄して、壁に付着したすべての細胞を洗い流します)、1000 rpm で 5 分間遠心します。
●3． 上清を捨て、1mlの培地を加えて細胞を懸濁します。 10mlの培地を含む10cmのペトリ皿に吸引し、ペトリ皿内の細胞が均一に分布するように前後に静かに振った。
●4. 細胞の種類と日付、培養者名などを記入し、CO2 インキュベーターに入れて培養します。 細胞が壁に付着した後、培地を交換します。
●5. 3 日ごとにメディアを変更します。
2.継代
●1． 培養皿の細胞被覆率が 80% -90% に達した時点で継代。
●2． 元の培地を吸引します。
●3． 適切なトリプシン (細胞を覆うのに十分な量) を加え、1-2 分間消化します。
●4. 細胞が丸められた後、同量の血清含有培地を加えて消化を終了させます。
●5. ピペットを使用して、ピペッティングによって細胞を中断します。
●6. 細胞を 15ml 遠心チューブに吸引し、1000 rpm で 5 分間遠心します。
●７． 上清を捨て、1-2ml の培地を加え、細胞を爆破します。
●8. 細胞の種類に応じて、細胞をいくつかの皿に移します。 通常、がん細胞は5個、正常細胞は3個です。 栽培を続けます。
3. 凍結保存 細胞を消化し、遠心分離します (同上)。 調製した凍結溶液で細胞を懸濁し、滅菌したクライオバイアルに分配し、数分間放置し、細胞の種類と凍結保存日を示します。 4 度で 30 分間、-20 度で 30 分間、-80 度で一晩後、液体窒素に入れて保存します。 凍結保存溶液の調製: 70% 完全培地 + 20% FBS + 10% DMSO。 DMSO は、滴りながら振とうしながら、ゆっくりと滴加する必要があります。
