操作方法や詳細、理論的な説明は、培養液や細胞フラスコの配置など、操作の指針となります。 滅菌手順; それらの正しい操作を学ぶには、初めて注意を払う必要があります。
子育てのように細胞を育てる
細胞は本当にデリケートです。 水不足、炭酸ガス不足、停電、インキュベーター内の温度不足などの異常現象を未然に防ぐため、毎日確認することをお勧めします。 これらの事故を時間内に解決して、実験を繰り返すことによる苦痛を回避することも必要です。 .
良い細胞は適時に播種する必要があります
細胞はバッチで継代されるため、1 つのバッチが失敗してもスペアが存在します。 後者のような普通の人には難しいかもしれません。 しかし、これは私の血の教訓です。 細胞が汚染されると、軍隊全体が一掃されました。 あの時、種を守れなかったことが悔やまれる。
各細胞には独自の特性があり、異なる方法で処理する必要があります。
細胞は人間と同じであり、異なる細胞には異なる培養特性があります。 栽培方法には十分注意してください。 異なる細胞株は異なる培地と血清を使用します。
例えば、私が育てる平滑筋細胞は非常に活発で、生き生きとしているのが好きです。 2-3日後に人口が多くなり、私はあまり食べたり飲んだりするのが好きではありません。 育てるには本当に最高の子です。 内皮細胞と平滑筋細胞は似たような性質を持っていますが、非常に不衛生でだらしがありません。 その中には多くの分泌細胞があるため、頻繁に交換して洗浄する必要があります。 RAW264.7 細胞もとても元気で、とても食べられます。 頻繁に餌をやる必要があります。 頭痛は、細胞が活性化されやすいことです。 ボトルや培養環境がエンドトキシンフリーなのは良いのですが、母である私が満足させるのは難しいです。
研修前の出勤準備
消耗品の取り扱い、試薬の構成、無菌試験などを含みます。
ガラス製品の洗浄。 ガラス器具（細胞瓶、栄養液の入った瓶、ペニシリンの小瓶など）は、粉末洗剤できれいにし（死角に注意）、すすぎます。 酸性溶液に 24 時間以上浸した後、きれいな水で 10 回洗い流し、残留酸性溶液を取り除きます。 すすぎの際、ボトル等が激しく揺れます。 次に、再蒸留水に 24 時間浸します。 乾燥後、ラップをして160度で2時間乾燥させます。
試薬構成。 細胞培養液としては、一般に２回以上の蒸留水を使用することがある。 また、pH値の調整にもご注意ください。
無菌試験。 主にフィルター滅菌を使用します: トリプシン、抗生物質、G-418 溶液、さまざまな培地、ピルビン酸ナトリウム、グルタミンなど。オートクレーブできるものもあります: PBS、D-ハンクスなど。
試薬はアリコートで保存されます
栄養液、パンクレアチン、血清などを含む
特に血清は重要です。 血清は-20度で保存する必要があります。 一度に 1 本のボトルを使いきれない場合は、40-50ml を無菌の酸処理ボトルに分配するか、ペニシリン ボトルに保存することもできます。 一般に、メーカーが提供する血清は無菌であり、無菌ろ過は必要ありません。 血清中に多くの浮遊物が見られる場合は、血清を培地に加えて一緒にろ過することができ、血清を直接ろ過するべきではありません。 (通常の状態では細胞培養に影響はありません)
ボトル入りの血清は徐々に解凍する必要があります。4 度の冷蔵庫で完全に溶解してから、パッケージに分割します。 溶解過程では、定期的に振って（気泡が入らないように注意）、温度と組成を均一にし、沈殿の発生を少なくする必要があります。 -20度から37度まで直接解凍しないでください。温度変化が大きく、タンパク質が凝固・沈殿しやすくなります。
加熱不活化とは、完全に解凍した血清を 56 度で 30 分間加熱することを指します。 ウォーターバスが56度に上昇したら、美容液を入れ、温度が56度に上昇するのを待って時間を数え、通常5分程度に1回均等に振ってください。 この熱処理の目的は、血清中の補体成分を失活させることです。 この加熱処理は、沈降物が著しく増加し、血清の品質に影響を与えるため、必要な場合を除き、通常は行われません。 血清の変更 (異なるバッチを含む) が細胞に及ぼす影響に注意してください。
不妊感が強い
実験前に、ウルトラクリーンベンチを 30 分間 UV 照射により滅菌し、無菌作業面を 70% エタノールで拭き取り、ウルトラクリーンベンチのファンを数分間オンにしてから実験操作を開始しました。 .
実験室での細胞培養の詳細については、http://www.shjasw.com/ をクリックしてください。
