細胞培養液には、新しい細胞の合成や細胞の代謝などの生化学反応に必要な物質やエネルギーを満たすために十分な栄養素が含まれている必要があります。 細胞培養培地の主成分は、水、アミノ酸、ビタミン、炭水化物、無機塩、およびその他の補助栄養素です。 したがって、細胞培養液の滅菌方法と関連する注意事項に注意して、毎日の実験を行う必要があります。
細胞培養
1. 各種細胞培養液の滅菌方法と注意事項
細胞培養液の滅菌方法は、オートクレーブ滅菌と膜ろ過滅菌に分けられます。 培地が異なれば、栄養素が異なるため、滅菌方法も異なる場合があります。
オートクレーブ
MEM などの一部の培地はオートクレーブできます。これらの培地は通常、L-グルタミンと重炭酸ナトリウムを含まず、通常、培地をオートクレーブした後に添加します。 さらに、L-グルタミンの代わりに高圧グルタミン酸 (L-アラニル-L-グルタミンなど) を使用することもできます。 オートクレーブ可能な培地は、滅菌時間を延長することなく、121 度、15 psi、15 分間で栄養素の損失を最小限に抑えて完全に滅菌されます。
ほとんどの細胞培養培地は、オートクレーブには適していません。 培地にはビタミン、タンパク質、ポリペプチド、増殖因子などを含むことが多いため、これらの物質は高温や放射線照射により変性や機能喪失を起こしやすいため、上記の液体は主に濾過滅菌して細菌を除去します。 ろ過滅菌用のろ過膜には多くの種類があり、材質は主にPES、ナイロン、ポリカーボネート、酢酸セルロース、ニトロセルロース、PTFE、セラミックスなどがあります。膜ろ過滅菌は現在一般的で便利な方法です。 0.2 μm の孔径のフィルター膜がよく使用され、0.1 μm の孔径を使用するものもあります。 高圧ろ過と比較して、メンブレンには寿命があり、より高価ですが、細胞培養培地の栄養素を破壊する可能性は低くなります。
2. 各種細胞培養液の保管上の注意
通常、液体細胞培養培地は-20度で凍結しないでください。解凍中に栄養素が沈殿し、培養効果に影響を与える可能性があるためです。 通常、光から2～8度離れた場所に保管してください。 使用前に冷蔵庫から取り出し、室温に置いて平衡化してください。 通常の液体培地の有効期間は 6 ～ 12 か月です。 液体細胞培養培地の長期保存は避けてください。 その中のグルタミンは、保管期間の延長とともにゆっくりと分解されます. 細胞の増殖が良くない場合は、培地中のグルタミン含有量をテストして、グルタミンを追加するかどうかを決定することを検討できます. . 市販の液体細胞培養培地には特定の使用期限があります。 乾燥粉末細胞培養培地を使用して液体を調製した後も、低温 (2 ~ 8 度) で保存する必要があります。 培地中のグルタミンの容易な分解に加えて、培地中の他の成分もまた、温度の上昇に伴って分解または沈殿する可能性があります。